- 如何选用细胞培养基？
细胞培养基是人工模拟细胞在体内生长的营养环境，是提供细胞营养和促进细胞生长增殖的物质基础。培养基中常常添加血清、抗生素等成分。培养基主要包括天然细胞培养基、合成细胞培养基和无血清细胞培养基等。由于细胞种类和培养条件不同，细胞培养基的选择也不同，在动物细胞培养中最常用的培养基是合成细胞培养基，如BME、MEM、DMEM、HAM F12、PRMI1640、199 等。由于天然培养基的一些营养成分不能被合成细胞培养基完全代替，因此一般需要在合成细胞培养基中添加5％～10％的血清。每一细胞株均有其特定使用且已适应的细胞培养基，一般在开始进行细胞培养之前，上ATCC、中国科学院细胞库或者其他细胞库查清楚每一株细胞的培养条件是很有必要的，若骤然使用和原先提供的培养条件不同的培养基，细胞大都无法立即适应，造成细胞无法存活。 - 为什么培养细胞要添加血清？
培养细胞用的培养基为人工合成，但动物细胞生活的内环境还有一些成分尚未研究清楚，加入动物血清是为了给体外培养的细胞提供一个类似生物体内的环境，此外动物血清中也包含了一些动物的激素和酶,可以促进细胞的发育。主要作用有：
(1) 提供基本营养物质：氨基酸、维生素、无机物、脂类物质、核酸衍生物等，是细胞生长必须的物质。
(2) 提供激素和各种生长因子：胰岛素、肾上腺皮质激素（氢化可的松、地塞米松）、类固醇激素（雌二醇、睾酮、孕酮）等。生长因子如成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、血小板生长因子等。
(3) 提供结合蛋白：结合蛋白作用是携带重要的低分子量物质，如白蛋白携带维生素、脂肪、以及激素等，转铁蛋白携带铁。结合蛋白在细胞代谢过程中起重要作用。
(4) 提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤，对培养中的细胞起到某些保护作用。
3.加到培养基中的血清 需要灭活吗？
这个要看做什么实验。血清灭活主要有两个作用：第一是灭活补体，第二是灭活血清中可能存在的支原体。如果用于培养大多数的肿瘤细胞，一般不需要灭活，这样可以有效保存血清中的生长因子。如果用于培养一些表面具有补体受体的细胞，如内皮细胞，则必须要灭活，一般56度水浴30min即可。
4.如何避免细胞污染？
细胞污染的种类可分成细菌、酵母菌、霉菌、病毒和霉浆菌。主要的污染源为无菌操作技术不当、操作室环境不佳、污染的血清和污染的细胞等。严格无菌操作技术、清洁的环境、使用品质良好的细胞株和培养基是减少污染的最好方法。
- 支原体(mycoplasma) 污染的细胞，是否能以肉眼观察出异状？
不能。除极有经验的专家外，大多数遭受支原体污染的细胞株， 无法以其外观来分辨细胞是否被支原体污染。
- 支原体污染会对细胞培养有何影响？
支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数，代谢及研究之任一数据。故进行实验前，必须确认细胞为mycoplasma-free，实验结果之数据方有意义。支原体检测方法：PCR、ELISA、荧光染色等
7.如何用台盼兰计数活细胞？
用无血清培养基把细胞悬液稀释到200－2 000个/毫升，在0.1毫升的细胞中加入0.1毫升的0.4％的台盼兰溶液。轻轻混匀，数分钟后，用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰，因而染成蓝色的细胞是死细胞。
8.能使用与原先培养条件不同的血清培养细胞吗？
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源，所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极大的影响。来自不同物种的血清，在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同，血清使用错误常会造成细胞无法存活。
9.细胞培养到何种程度进行换液和传代？
当培养基pH降低时进行换液，培养基颜色由红变橙要警惕，变成黄色之前一定要换液。pH降至6.5时，细胞停止生长；降至6.0，细胞失去活性，无法挽救，若培养物密度过低或者生长缓慢，则更换一半培养基。当细胞密度达到90％时，需要进行传代。一般按1:2～1:4传代，接种密度104～105/ml，传代次数按细胞生长情况来决定。
10.培养用液pH对细胞生长有影响吗？
由于，大多数细胞适宜pH为7.2~7.4，偏离此范围对细胞将产生有害的影响。各种细胞对pH的要求也不完全相同，原代培养细胞一般对pH变动耐受差，无限细胞系耐受力强。但总体来说，细胞耐酸性比耐碱性强一些，偏酸环境中更利于细胞生长。