1. 什么是外泌体？
Exosome，中文名外泌体，是一种能被大多数细胞分泌的微小膜泡，具有脂质双层膜结构，直径大约40-100 nm。细胞在正常及病理状态下均可分泌外泌体，它的主要来源是细胞内溶酶体微粒内陷形成的多囊泡体，经多囊泡体外膜与细胞膜融合后释放到细胞外基质中。
外泌体天然存在于体液中，包括血液、尿液、唾液、脑脊液及乳汁中，参与细胞间通讯。
2.外泌体研究，选用用血浆还是血清？
答：关于血清和血浆选择的问题，做外泌体研究到底应该选哪个呢?
血浆=血液-血细胞
血清=血浆-纤维蛋白原-凝血因子
血清是血液凝固之后收集的液体，所以其中少了纤维蛋白原，凝血因子，以及多了很多凝血产物。纤维蛋白原可转化为纤维蛋白，具有凝血功能。在凝血过程中血小板会分泌大量的外泌体，有研究发现血清中有接近50%的外泌体来自额外的分泌。
所以一般实验选择血浆，在特殊情况下，如研究与血小板相关的疾病的时候，当然是血清更适合。
3. 外泌体的分离方法这么多，选择哪一种更好？
答：a、超速离心法是目前最常用的外泌体纯化手段，此方法可以获得高度纯化的外泌体，但也存在一些缺点。例如同批次最多只能同时处理6个样本（转子限制）且回收率不稳定，前期需要准备大量材料且外泌体得率低。
b、超滤离心法是利用不同截留相对分子质量(MWCO)的超滤膜进行选择性分离，小分子物质会被过滤到膜的另一侧，而大于膜孔径的高相对分子质量物质则截留在超滤膜上。这种方法比较简单高效，也不影响外泌体的生物活性，但缺点是外泌体可能会阻塞过滤孔，导致膜的寿命减短，分离效率较低。此外，截留在膜上的外泌体间也会发生粘附，导致产量降低。
c、聚乙二醇（PEG）可与疏水性蛋白和脂质分子结合共沉淀，早期应用于从血清等样本中收集病毒，现在也被用来沉淀外泌体，其原理可能与竞争性结合游离水分子有关。在4℃利用PEG孵育后通过过滤或离心即可沉淀、回收外泌体。采用此种分离方法也存在不少问题：纯度和回收率低，杂蛋白较多，机械力或者吐温-20等化学添加物将会破坏外泌体等。
d、磁珠免疫法具有特异性高、操作简便、不影响外泌体形态完整等优点，但是效率低，外泌体生物活性易受pH和盐浓度影响，不利于下游实验，难以广泛普及。
e、商品化的试剂盒具备操作简单的特点外，能纯化富集外泌体快速。
外泌体提取相关方法汇总如上，在开展实验时可根据实际情况进行选择，一般建议，样品量足够的话首选超速离心法，样品量少的话选择合适的商品化试剂盒。
4. 外泌体提取试剂提取外泌体 请教一般后续检测QPCR，需要多少血浆呢？多少ml的血清或血浆提出来的外泌体够同时做RNA测序和蛋白质谱的吗？
答：1-2ml的血浆足够后续的QPCR检测；4ml的血清或血浆可满足RNA测序和蛋白质谱的需求。
5.如何鉴定提取出来的外泌体？
答：根据国际细胞外囊泡协会于2014年发表的一个指导手册（MISEV），鉴定外泌体首先需要通过WB来鉴定细胞外囊泡的标志蛋白是否存在于样品中，通过电子显微镜来观察样品中细胞外囊泡的形态特征，通过NTA等手段来分析样品中细胞外囊泡的群体特征（粒子浓度、直径分布等）。
6．提取出来的外泌体能否应用于细胞共培养。
答：我们提取出来的外泌体通过粒径检测能判断其纯度（粒径大小均在外泌体的大小范围），电镜检测能判断其形态确为外泌体。如果样品中的外泌体有活性的话是可以进行细胞共培养的实验的。
7.外泌体如何保存？
答：纯化完成后的外泌体可分装成50-100ul后置于-80℃保存。
8.用吉赛的外泌体提取试剂盒从2ml血清血浆提取出来的外泌体能有多少？能满足后续的电镜和WB吗？BCA方法测定的蛋白浓度是多少？
答：2ml血清血浆提取出来的外泌体数量约1*10的8次方-9次方，可以满足。BCA方法测定的蛋白浓度为2~4ug/ul
9. 外泌体电镜是不是一定要有膜结构，无膜结构的球体对不对？
负染电镜结果中外泌体的形态肯定是那种明显的茶托样或者大饼样的！边缘有一圈略微更明亮的亮圈。如果你打到的结构是没有膜结构的圆球形，那么您很可能看到了脂蛋白颗粒或者抱团的蛋白质。
10．为什么超速离心提取外泌体看不到沉淀？
这种问题通常有三种可能性，其一：使用的细胞上清或者血清量太低，从而造成了这样的结果。。其二：使用了不透明的超速离心管，一般来说外泌体产量都比较小，所以凡是不透明的管子，基本都是很难见到明显沉淀的，可以当做有沉淀，然后操作下去即可。其三：使用了角转。部分品牌离心机的角转管壁粘附性很低，超离结束没多久沉淀就会滑落下去，所以请在离心结束时赶紧去收样。