5月13日，Molecular Cancer杂志在线发表了复旦大学中山医院樊嘉院士和施国明教授为共同通讯作者的文章，报道在HCC中circMEMO1表达显著下调，与不良预后有关。
circMEMO1在HCC中显著下调
借助显微切割技术，作者精确分离了HCC的癌组织和癌旁发育不良结节（paratumour dysplastic nodule），芯片法分析了3对组织中circRNA的表达情况，其中有28种circRNA表达上调，18种circRNA表达下调。其中来自MEMO1的7-8外显子的circRNA（circMEMO1）在HCC中表达显著下调。HCC标本中QPCR验证结果显示，大部分HCC中circMEMO1表达下调，并且低表达circMEMO1的患者预后显著更差。
图1 HCC中circMEMO1表达下调，与不良预后有关（[1]）
HCC中circMEMO1抑制增殖和迁移侵袭
分别设计circMEMO1是shRNA和过表达载体，分析其生物学功能。结果表明，HCC中过表达circMEMO1后抑制细胞增殖和迁移侵袭，而干扰circMEMO1后促进细胞增殖和迁移侵袭。体内成瘤模型表明，过表达circMEMO1可抑制肿瘤生长和肺转移。
图2 HCC中circMEMO1抑制细胞增殖和迁移侵袭（[1]）
circMEMO1竞争性结合miR-106b-5p，调控TET1/5hmC
序列分析表明，circMEMO1可能具有竞争性结合miR-106b-5p的作用。生物素标记探针的pull-down实验证明了circMEMO1与miR-106b-5p的相互作用。在线工具分析显示，TET1和TET2可能是miR-106b-5p的下游作用靶标。miR-106b-5p的shRNA，荧光素酶实验证明了这一点。研究报道显示，TET1/2可以调控5hmC修饰状态。过表达和干扰miR-106b-5p后免疫荧光和斑点杂交实验的结果显示，miR-106b-5p可改变总5hmC的水平，但对5mC修饰状态没有明显影响。过表达circMEMO1后TET1/2表达升高，干扰后降低。斑点杂交显示，过表达circMEMO1后5hmC修饰升高，干扰后降低。
图3 circMEMO1和miR-106b-5p均可影响TET1/2表达及基因组DNA总5hmC水平（[1]）
HCC标本miR-106b-5p和TET1/2表达与预后关系
标本群体表达相关性分析显示，circMEMO1和TET1及TET2的表达呈现正相关关系。高表达TET1的患者生存状态更好，累积复发率更低。HCC标本中miR-106b-5p表达越高的患者，5hmC修饰状态更低，分期和预后状态更好。
图4 HCC中TET1/2，miR-106b-5p表达与预后的关系（[1]）
HCC中circMEMO1通过miR-106b-5p/TET1/5hmC调控EMT状态
免疫荧光检测显示，干扰circMEMO1可显著降低E-Cadherin的表达，WB和克隆形成实验进一步表明，干扰circMEMO1后促进EMT，过表达circMEMO1则抑制EMT。过表达TET1的同时干扰circMEMO1或过表达miR-106b-5p均可抑制细胞侵袭能力。设计干扰circMEMO1与过表达miR-106b-5p，TET1的实验，分析EMT状态，5hmC修饰状态，结果显示，circMEMO1可以通过miR-106b-5p/TET1/5hmC调控HCC的EMT状态。
图5 HCC中circMEMO1通过miR-106b-5p/TET1/5hmC调控EMT状态（[1]）
circMEMO1通过调控DNA去甲基化状态和TCF21抑制HCC进程
HCC标本分析显示，miR-106b-5p的表达与TCF21呈负相关的状态，而TCF21的表达与CDH1的表达正相关。TCF21的表达在多种肿瘤中均下调，包括HCC。HCC标本的DNA甲基化状态高于对照组。基于干扰和过表达实验，作者发现HCC中circMEMO1通过miR-106b-5p调控了TCF21的表达。
图6 circMEMO1通过调控DNA去甲基化状态和TCF21抑制HCC进程（[1]）
circMEMO1与HCC对索拉菲尼药物的敏感性有关
索拉菲尼是目前肝癌治疗的一线药物，因此，作者也分析了circMEMO1表达与HCC索拉菲尼药物敏感性的关系。在HCC标本中，高表达TCF21的患者预后相对较好。HCC细胞中，干扰circMEMO1会降低索拉菲尼药物对HCC细胞的毒性作用，而过表达circMEMO1则促进索拉菲尼药物敏感性。临床标本中分析表明，在索拉菲尼给药的换这种，circMEMO1表达高的患者索拉菲尼用药效果好于circMEMO1表达低的患者。
HCC中circMEMO1表达下调。circMEMO1具有竞争性结合miR-106b-5p的作用，进而通过TET影响了TCF21启动子的5hmC修饰状态，降低TCF21的表达，最终导致Snail，Vimentin等EMT相关基因的上调，降低了HCC对索拉菲尼药物的敏感性。
图7 HCC中circMEMO1与索拉菲尼药物敏感性有关（[1]）
参考文献：
1. Dong ZR, Ke AW, Li T, Cai JB, Yang YF, Zhou W, Shi GM, Fan J. CircMEMO1 modulates the promoter methylation and expression of TCF21 to regulate hepatocellular carcinoma progression and sorafenib treatment sensitivity. Mol Cancer. 2021 May 13;20(1):75. doi: 10.1186/s12943-021-01361-3.